Flowcytometrická analýza B lymfocytů a plazmocytů u monoklonálních gamapatií
| Authors | |
|---|---|
| Year of publication | 2012 |
| Type | Conference abstract |
| MU Faculty or unit | |
| Citation | |
| Description | Mnohočetný myelom (MM) je charakteristický přítomností klonálních plazmocytů (PC), které vznikají maligní transformací B lymfocytů (B-ly). Není však jasné, které diferenciační stádium B-ly je zodpovědné za vznik a případný relaps onemocnění po léčbě, proto je v současnosti snaha nalézt takovýto zdroj myelom-iniciujících buněk. Cílem naší práce je identifikovat a popsat jednotlivé subpopulace B-ly včetně ověření jejich klonality na buněčné úrovni, zavést tyto analýzy ve zjednodušené podobě do rutinní diagnostiky a v neposlední řadě identifikovat zdrojovou populaci myelom-iniciujících buněk. Analýzy byly prováděny v periferní krvi (PK) či kostní dřeni (KD) metodou polychromatické průtokové cytometrie. Pro identifikaci subpopulací B-ly byla využita kombinace povrchových markerů CD38/CD45/IgD/CD24/(CD20 pro PK/138 pro KD)/CD19/IgM/CD27, pro ověření klonality subpopulací byly analyzovány povrchové znaky v kombinaci s cytoplazmatickými lehkými Ig řetězci (CD38/CD45/ckappa/clambda/CD20/CD19/CD138/CD27) . V PK byly takto identifikovány přechodné, naivní a preGC B-ly, dále paměťové B-ly (s/bez izotypového přesmyku) a plazmablasty. V KD byly navíc identifikovány nezralé B-ly a CD19+/CD19- plazmocyty. V PK i KD se nám navíc podařilo identifikovat subpopulaci izotypově přesmyknutých CD27- B-ly, což by pravděpodobně mohly být paměťové B-ly, které znak CD27 neexprimují. Vhodnou kombinací markerů lze tedy identifikovat v jedné analýze až 10 subpopulací diferencujících se B-ly včetně PC. Jsme schopni rozpoznat populaci plazmablastů a také patologickou sIgM+ populaci B-ly u Waldenströmovy makroglobulinemie. Analýzy klonality nám pak umožňují odhalit klon B-ly v případě souběhu MM s jiným lymfoproliferativním onemocnění. Navíc byla touto analýzou zjištěna souvislost mezi nálezem klonálních plazmablastů a klonálních CD19+ PC u pacientů s MM. Polychromatická průtoková cytometrie v 8-barevném nastavení nám tedy umožňuje, na pozadí normálních diferencujících se B-ly, identifikovat subpopulace klonálních B-ly. Tyto analýzy jsou přínosné jednak pro zpřesnění diagnostiky MG a mohly by také, spolu s analýzou na DNA úrovni, napomoci nalezení zdrojové populace myelom-iniciujících buněk. |