| Popis |
Staphylococcus aureus je významným bakteriálním původcem závažných nozokomiálních infekcí. Některé jeho kmeny produkují toxiny, které mohou u lidí způsobit toxické epidermolýzy, alimentární enterotoxikózy anebo syndrom toxického šoku. S využitím specifických oligonukleotidových primerů byla v genomových DNA 84 toxinogenních kmenů S. aureus provedena identifikace strukturních genů kódujících exfoliatiny ETA a ETB, toxin syndromu toxického šoku TSST-1 a enterotoxiny SEA, SEB a SEC. Přítomnost jednotlivých genů byla potvrzena vznikem specifických PCR produktů (bp): eta ~119, etb ~200, tsst ~390, sea ~180 (jeden SEA-kmen měl 250bp amplikon, obsahující inzerci), seb ~478, sec1 ~257 a sec2,3 ~360. Hybridizací s digoxigeninem značenými molekulárními sondami, připravenými v PCR, byly lokalizovány sekvence genů kódujících jednotlivé exotoxiny na následujících DNA fragmentech: gen tst na 83bp SmaI fragmentu u 67 % TSST-kmenů a na 260bp fragmentu u 29 % TSST-1 kmenů. Sekvence genu eta byly u ET-pozitivních kmenů většinou lokalizovány na 6,2 a 4,2 bp HindIII fragmentech a na 4,9 a 2,5 bp EcoRI fragmentech. U tří kmenů, které tvořily exfoliatin ETB současně s exfoliatinem ETA, byla hybridizací prokázána lokalizace etb genu na 40kb plazmidu. Gen sea, kódující enterotoxin A, byl lokalizován na 8,6kb EcoRI a HindIII fragmentu u všech SEA-kmenů. U kmenů produkujících SEC1 a SEC2,3 molekulární sonda hybridizovala se třemi HindIII fragmenty (6, 5 a 3 kb), což indikuje výskyt více kopií sekvencí genů kódujících enterotoxiny skupiny C. Ukázalo se, že PCR s použitím specifických primerů je vhodnou metodou pro rychlou identifikaci toxinogenních kmenů S. aureus, avšak je třeba ji upřesnit hybridizací genomové DNA se specifickou molekulární sondou.
|